下述精巧的方法曾用来构建不同酶的DNA分子的限制酶图谱。首先,利用多核苷酸酶将噬菌体DNA的5'-末端标记上 32 P。样品分成两半,每份用酶Ⅰ或酶Ⅱ酶解。两份酶解物分别进行电泳,记下放射性带。这个实验鉴定出末端片段,提供的信息后面有用。该技术的要点是同时利用未标记的和均一标记的DNA样品。未标记样品用酶Ⅰ酶解,进行电泳时采取措施使条带较宽。用标准的溴化乙锭荧光技术定位这些条带,记录它们的位置,将凝胶浸在碱性溶液中使DNA变性,然后将条带转移到硝酸纤维素膜上,得到图16-3-13所示的谱型。 32 P标记的样品用酶Ⅱ处理、电泳、记录条带位置,将DNA碱变性,然后转移到含酶Ⅰ片段的硝酸纤维素膜上。转移时使弛P条带与未标记的条带成正交,如图6-3-13所示。然后将膜置于复性条件,洗涤,用放射自显影定位放射性。图16-3-13显示每条胶中条带位置(细线)和放射性位置(小圆点)。标有星号的条带是末端片段。试画出每种酶的限制酶图谱。数字表示每个片段的长度(kb),实心圈表示放射性区域。