目前基因工程所用的载体主要是以天然细菌的各种元件为基础重新组建的人工, pBR322 是较早构建的载体,其主要结构如图一所示。 (1) 构建人工时要有抗性基因,以便于 ____________________________ 。 (2)pBR322 分子中有单个 EcoRI 限制酶作用位点, EcoR I 只能识别序列 —GAATTC— ,并只能在 G 与 A 之间切割。若在某目的基因的两侧各有 1 个 EcoR I 的切点,请画出目的基因两侧被限制酶 EcoR I 切割后所形成的黏性末端。 ______________________ 。 (3)pBR322 分子中另有单个的 BamH I 限制酶作用位点,现将经 BamH I 处理后的与用另一种限制酶 Bgl II 处理得到的目的基因,通过 DNA 连接酶的作用恢复 ________ 键,成功地获得了重组,这说明 _____________________________________________ _____________________________________________________ 。 (4) 为了检测上述重组是否导入原本无 Ampr 和 Tetr 的大肠杆菌,将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养,得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含四环素的培养基上培养,得到如图三的结果 ( 空圈表示与图二对照无菌落的位置 ) 。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是 ___________ ,图三结果显示,多数大肠杆菌导入的是 ________ 。