金属硫蛋白( MT )是一类广泛存在的金属结合蛋白,某研究小组计划通过多聚酶链式反应( PCR )扩增获得目的基因,构建转基因工程菌,用于重金属废水的净化处理。如图是 PCR 扩增过程示意图,请回答下列问题: 1 从高表达 MT 蛋白的生物组织中提取 mRNA ,通过 ______ _ 获得 _ ____ _ 用于 PCR 扩增。 2 设计一对与 MT 基因两端序列互补配对的引物( 引物1和引物2 ),为 方便构建重组质粒,在引物中需要增加适当的 _____________________ _____ 位点。设计引物时需要避免引物之间形成 ______________ ,而造成引物自连。 3 图中步骤 1 代表 _ ____ ,步骤 2 代表退火,步骤 3 代表延伸,这三个步 骤组成一轮循环。 4 PCR 扩增时,退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏 __________ 的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关,长度相同但 _碱 基 _ _________ 含 量 高 的引物需要设定更高的退火温度。 5 如果 PCR 反应得不到任何扩增产物,则可以采取的改进措施有 _____ ( 填字母: A. 升高退火温度 B. 降低退火温度 C. 重新设计引物 )。