(2020· 山东省等级考试模拟, 25) 基因定点整合可替换特定基因,该技术可用于单基因遗传病的治疗。苯丙酮尿症是由 PKU 基因突变引起的,将正常 PKU 基因定点整合到 PKU 基因突变的胚胎干细胞的染色体 DNA 上,替换突变基因,可用来研究该病的基因治疗过程。定点整合的过程是:从染色体 DNA 上突变 PKU 基因两侧各选择一段 DNA 序列 HB1 和 HB2 ,根据其碱基序列分别合成 HB1 和 HB2 ,再将两者分别与基因 HSV - tk 1 、 HSV - tk 2 连接,中间插入正常 PKU 基因和标记基因 neo r ,构建出如图所示的重组载体。重组载体和染色体 DNA 中的 HB1 和 HB2 序列发生交换,导致两者之间区域发生互换,如图所示。 (1) 构建重组载体时,常用的工具酶有 ______________________________ 。 该实验用胚胎干细胞作为 PKU 基因的受体细胞以培育出转基因,除了胚胎干细胞能大量增殖外,还因为胚胎干细胞 ________ 。 (2) 为获得的胚胎干细胞,可将囊胚中的 ________ 取出,并用 ________ 处理使其分散成单个细胞进行培养,培养过程中大部分细胞会贴附在培养瓶的表面生长,这种现象称为 ________ 。 (3) 用图中重组载体转化胚胎干细胞时,会出现 PKU 基因错误整合。错误整合时,载体的两个 HSV - tk 中至少会有一个与 neo r 一起整合到染色体 DNA 上。已知含有 neo r 的细胞具有 G418 的抗性, HSV - tk 1 、 HSV - tk 2 的产物都能把 DHPG 转化成有毒物质而使细胞死亡。转化后的胚胎干细胞依次在含有 G418 及同时含有 G418 和 DHPG 的培养液中进行培养,在双重选择下存活下来的是 ________ 的胚胎干细胞,理由是 _______________________________________________ ________________________________________________________________ 。 (4) 将筛选得到的胚胎干细胞培育成,从个体生物学水平检测,若 ________ ,说明 PKU 基因成功表达。