大肠杆菌的dnaB基因编码一个在复制叉上可将DNA解折叠的解旋酶(DnaB)。已利用如图Q2.5所示的人工底物对它的特性进行了研究。实验方法是在多种条件下培养底物,然后把样品进行琼脂糖凝胶电泳。如果短单链DNA与长的DNA已退火结合在一起,那么泳动速率就会快些,但如果它已解折叠且已变性,则泳动速率就会慢些。把短链进行放射性标记就可选择性地跟踪它的迁移,然后用放射自显影检查它的位置。图Q2.6所示为几个实验的结果,底物1没有尾巴的杂交体,不被DnaB解折叠(图Q2.6,第1泳道、第2泳道);但是有尾的底物和DnaB、ATP在37℃下同样能释放出大量解折叠的小片段(第6泳道、第10泳道)。对于底物3,只有3'部分片段是解折叠的(第10泳道),所有的解折叠产物都绝对依赖于ATP的水解。加DNA单链结合蛋白(SSB)可在一定程度上加强这种解折叠(比较一下第5泳道、第9泳道与第10泳道)。有趣的是,SSB必须在DnaB加后3min加入,否则会抑制解折叠。 图Q2.5用来检测DnaB的底物 图Q2.6几个检测DnaB解折叠实验的结果,只有单链片段被放射性标记,它们各自的位置已在图中标明